实验十    实验室尿常规检验

 

                                 目 的 和 要 求

 

掌握尿液化学检验方法及尿沉渣的检查方法，要求学生按本指导所列方法顺利操作，并能认识某些沉渣及管型。

                         内 容 和 方 法

 

（一）尿液酸碱度的测定

1.PH试纸法  可先用PH广泛试纸条，然后再用精密试纸条浸湿被检的新鲜尿液，立即与标准色板比较，判断尿液的PH范围，作出半定量。

2.PH计测定法  用PH计电极可精确测出尿液PH值。

（二）尿液蛋白质检验

1.干化学试纸法  按蛋白质试纸产品说明书要求，取有效试纸条，浸入被测尿液中一定时间，取出后在容器边缘除去多余尿液，30S内对照标准色板比色，根据说明判断结果。

2.硝酸法  取中试管1支，滴加35﹪硝酸1～2ml（20～40滴），在沿试管壁缓缓滴加尿液，使两液重叠，静置5min，观察结果。两液重叠而产生白色环者为阳性反应。白色环愈宽，表示蛋白质含量愈高，可用1～3个“＋”号表示之。

3.加热醋酸法  取约10ml新鲜澄清尿液于一耐热大试管内，将试管斜置在火焰上，煮沸上部尿液。滴加稀醋酸（冰醋酸5ml加水至100ml配制而成）3～4滴，再煮沸后，在黑色背景下对光观察结果。如有浑浊或沉淀，提示尿内含有蛋白质。浑浊程度越高，表示蛋白质含量越高，可用1～4个“＋”号表示之。

4.磺基水杨酸法 取试管1支，加入澄清尿液2～3ml，滴加磺基水杨酸试剂（由磺基水杨酸20g，加入溶解至100ml配制而成），立即轻轻混匀，于1min内观察结果，根据浑浊程度判断为1～4个“＋”。

应注意马的尿中含有大量碳酸钙，因此应事先加入适量10﹪醋酸液使尿成酸性，尿液即透明，便于观察结果。

（三）潜血的检验

 健康动物的尿液不含有红细胞或血红蛋白。尿液中不能用肉眼直接观察出来的红细胞或血红蛋白叫做潜血（或叫隐血），可用化学方法加以检查。

1.原理 尿液中的血红蛋白或红细胞被酸破坏所产生的血红蛋白，有过氧化氢酶的作用（但并非为酶，因为被煮沸后仍有触媒作用），它可以分解过氧化氢而产生新生态的氧，使联苯胺氧化呈蓝色的联苯胺蓝。

2.器材与试剂  小试管，滴管，普通滤纸，酒精灯，试管夹等。联苯胺，冰醋酸，过氧化氢溶液，乙醚，95﹪乙醇。

3.操作方法

（1）联苯胺法 取联苯胺少许（约一刀尖），溶解在2ml冰醋酸中，加双氧水2～3ml，混合。混合后，加入等量被检尿，如液体变绿或蓝色，表示尿中有血红蛋白存在。本法简便且比较灵敏，但当尿中含有大量磷酸盐时，可发生乳白色沉淀，使反应无法测出。遇此情况，可选用下述“改良联苯胺法”。

（2）改良联苯胺法 取尿液10ml置于试管中，加热煮沸以破坏可能存在的过氧化氢酶。待冷却后，加入冰醋酸10～15滴，使尿呈酸性。再加乙醚约3ml，加塞充分振摇。然后静置片刻，使乙醚层分离（如乙醚层成胶状不易分离时，可加入95﹪乙醇数滴以促其分离）血红蛋白在酸性环境下，可溶于乙醚内。取滤纸1小片，滴加联苯胺冰醋酸饱和液数滴，再在此处滴加上述乙醚浸出液数滴，待乙醚蒸发后，再滴加新鲜过氧化氢液 1～2滴。如尿内含有血液，滤纸上可显蓝色或绿色，其颜色深度与含量呈正比。

根据颜色的深浅，用1～4个“＋”号报告结果（绿色＋，蓝绿色＋＋，蓝色＋＋＋，深蓝色＋＋＋＋）。

（3）注意事项 尿液应先加热煮沸，以破坏可能存在的过氧化氢酶，防止产生假阳性。

所用试管、滴管等器材，必须清洁。

（四）尿中尿胆素原的检验

1.Ehrlich醛反应定性法

（1）原理  尿胆素原在酸性溶液中与对二甲氨基苯甲醛反应，生成红色化合物。

（2）器材与试剂  先将对二甲氨基苯甲醛2.0g溶于80ml蒸馏水中，再加入浓盐酸20ml，边加边摇，置棕色瓶保存，此称Ehrlich试剂。

（3）操作方法

①如尿内含有胆红素，应先取尿液和0.5mol/L氯化钡各1份混匀，2000r/min离心5min，除去胆红素，取上清液试验；

②直接取尿或除去胆红素上清1.0ml，加Ehrlich试剂0.1ml混匀；

③静置10min，在白色背景下从管口向底观察结果。

（4）结果判断 

阴性：不显樱红色；弱阳性：呈淡樱红色；阳性：呈樱红色；强阳性：呈深樱红色。

（5）注意事项

①尿液必须新鲜，避光保存；

②尿中有酮体、磺胺类药等可出现假阳性；

③反应结果受试管中液体高度影响，应统一用10mm×75mm试管。

④也可用尿胆素原试纸检测，详见有关产品说明书，但敏感性较差。

2.尿胆素原定量法

（1）原理  尿液中的尿胆素原与醛试剂作用，生成尿胆素原醛红色化合物。生成的红色与人工标准酚磺酞的颜色比较，得出尿胆素原含量。

（2）器材与试剂

①醛试剂  称取对二甲氨基苯甲醛0.7g，溶于浓盐酸（AR）150ml，再加入蒸馏水100ml混匀，贮存棕色瓶内，可保存3～6个月。

②饱和乙酸钠溶液。

③抗坏血酸粉（AR）。

④酚磺酞（酚红）标准液  准确称取酚磺酞20.0mg，溶于10mmol/LN_aOH液中，至100ml，作为贮存液。临用时，用10mmol/LN_aOH液稀释100倍，其红色程度相当于结合尿胆素原5.86μmol/L。

（3）操作方法

①取尿作胆红素定性试验，如阳性，应以尿液10ml与0.5mol/L氯化钙2.5ml充分混合后过滤，收集尿液备用。报告结果时应将测定结果乘以1.25，以校正稀释倍数。

②溶100mg抗坏血酸于尿液10ml内，混匀后取两支试管，分别标明测定管和空白管，每管中各加入上述尿液1.5ml；向空白管加饱和乙酸钠液3.0ml，混匀再加醛试剂1.5ml；测定管加醛试剂1.5ml，混匀再加饱和乙酸钠液3.0ml。

③10min内，用562nm波长比色，蒸馏水调零，分别读取空白管、测定管及标准管和吸光度（562nm波长，光径1cm比色皿，此标准液吸光度为0.384）。

（4）计算

＝

×23.4

×5.86×

测定管吸光度－空白管吸光度          6.0      测定管吸光度－空白管吸光度

标准管吸光度                  1.5           标准管吸光度
（5）注意事项

①标本必须新鲜，收集后立即测定，避免光的照射。

②尿中其他物质也可能与醛试剂显色，但通常反应时间较长，故在加入醛试剂混匀后，应立即加入饱和乙酸钠终止颜色反应。

③尿中如有胆红素则呈绿色反应，必须预先除去。

④磺胺类、普鲁卡因、5－羟吲哚酸等与醛试剂作用呈假阳性。

（五）尿液葡萄糖的检验

健康动物的尿中可有微量葡萄糖，定性试验为阴性。糖定性试验呈阳性的尿液称为糖尿，表示单位时间内流经肾小球中葡萄糖过多（高血糖）或肾小管上皮细胞回收葡萄糖能力下降。

1.葡萄糖氧化酶试纸定性（半定量）试验

（1）原理  葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下，失去两个氢离子后形成葡萄糖内酯，再经水化后，氢离子与空气中氧结合，分解成葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧化物酶存在下，还原生成水，使供氢体色素原（无色邻甲苯胺或甲基联苯胺）氧化而呈色，根据颜色深浅，判断葡萄糖含量。

（2）器材和试剂

①尿糖试纸  含葡萄糖氧化酶过氧化物酶、邻联甲苯胺试剂。

②标准色板  为黄色至蓝色不同浓度的色板。

③操作方法  可按说明书进行，一般是将尿糖试纸浸入尿水中，2～4S后取出，1min整在自然光下与标准色板比较判断结果。不变色为阴性（－），淡灰色为弱阳性（＋），灰色为阳性（＋＋），灰蓝色为强阳性（＋＋＋），紫蓝色为极强阳性（＋＋＋＋）。

2.糖还原试验法  本法使用较广，其敏感度为5.5mmol/L，许多单糖和一些非糖还原物质都能和它反应，因此本法是测定尿中总还原物。

（1）原理  葡萄糖含有醛基，在热碱性溶液中，能将硫酸铜还原成黄色的氧化铜或黄红色的氧化亚铜。

（2）器材与试剂  班氏试剂 结晶硫酸铜17.3g，无水碳酸钠100.0g，枸橼酸钠173.0g，蒸馏水加至1000ml。

先将枸橼酸钠及无水碳酸钠溶解于700ml蒸馏水中，可加热促其溶解。另将硫酸铜溶解与100ml蒸馏水中，然后将硫酸铜液慢慢倾入已泠却的上液内，并加蒸馏水至1000ml，过滤保存于褐色瓶内备用。

（3）操作方法  取班氏试剂5ml置于试管中，加尿液0.5ml（约10滴）充分混合，加热煮沸1～2min，静置5min后观察结果。

（4）结果判断  管底出现黄色或黄红色沉淀者为阳性反应。黄色或黄红色的沉淀愈多，表示尿中葡萄糖含量愈高。亦可按表10-1估计葡萄糖的大约含量。

表10—1  尿中葡萄糖大约含量表

符号	反应	葡萄糖的大约含量
－	试剂仍呈清晰蓝色	无   糖
＋	仅有冷后才有微量黄绿色沉淀	约0.5～1g％以下
＋＋	静置后，管底有多量黄绿色沉淀	约0.5～1g％
＋＋＋	静置后，管底有多量黄色沉淀	约1～2g％
＋＋＋＋	静置后，管底有多量黄红色沉淀	约2g％以上

 

（5）注意事项

①尿液中如含有蛋白质，应把尿液加热煮沸，然后过滤，再行检验。

②尿液与试剂一定要按规定的比例加入，如尿液加得过多，由于尿液中某些微量的还原物质，也可产生还原作用而呈现假阳性反应。

③应用水杨酸类、水合氯醛、维生素C及链霉素治疗时，尿中可能有还原物质而呈假阳性反应。

（六）尿中酮体的检验

1.Lange法

（1）原理  酮体中的丙酮和乙酰乙酸在碱性溶液中与亚硝基铁氰化钠作用可产生紫红色的亚铁五氰化铁，这种产物在醋酸溶液内不但不褪色，反而颜色会加深。

（2）器材与试剂

①5％亚硝基铁氰化钠溶液。此液应新配制，贮于棕色瓶中可保存1周。

②10％氢氧化钠溶液。

③20％醋酸液。

（3）操作方法  取中试管1支，先加尿液5ml，随即加入5％亚硝基铁氰化钠溶液和10％氢氧化钠溶液各0.5ml（约10滴），颠倒混合，再加20％醋酸约1ml（20滴），再颠倒混合，观察结果。

（4）结果判断  尿液呈现红色者为阳性，加入20％醋酸后红色又消失者为阴性。根据颜色深浅不同，可估计酮体得大约含量，见表10-2。

表10—2  尿中酮体大约含量表

符     号	反     应	酮体得大约含量（mg％）
＋	浅红色	3～5
＋＋	红  色	10～15
＋＋＋	深红色	20～30
＋＋＋＋	黑红色	40～60

 

2.Rothera改良法

（1）器材与试剂  称取亚硝基铁氰化钠粉末10mg和硫酸铵20g，无水碳酸钠20g研磨混合，密封保存。

（2）操作方法  取试剂约1g放在白色瓷凹板上，加2～3滴尿液，混合。在数分钟内出现不褪色的紫红色为阳性。

3.试纸法  可购商品酮体检查试纸（单联或多联），浸入尿中取出，除去试纸上多余尿液，按规定时间与标准色板比较判定结果。

（七）尿中尿蓝母的检验

由蛋白质分解的色氨酸经肠内细菌的作用而产生靛基质，或称吲哚，它在肝脏内氧化为羟吲哚，再与硫酸盐结合成为羟吲哚硫酸钾，称为尿蓝母。尿蓝母本为动物尿中的正常成分，但因含量不多，用化学试剂检验多呈阴性。检查方法常采用奥（Obermayer）氏法。

1.原理  尿蓝母经盐酸作用，分解为硫酸钾和氧化吲哚，后者再被三氯化铁氧化而生成靛蓝，靛蓝易溶于氯仿中，因之氯仿被染成蓝色。如氧化过剧，则可使羟吲哚成为吲哚醌（红靛）而显红色。

2.器材与试剂

①奥氏试剂  浓盐酸100.0ml，三氯化铁0.2g。

②氯仿。

3.操作方法  取中试管1支，加尿液及奥氏试剂各5ml，试管口加一橡皮塞，充分颠倒混合10～20次，静置5～10min，使试剂与尿液充分作用，然后加氯仿1ml，再颠倒混合10余次，静置片刻，待氯仿下沉管底后，观察结果。

4.结果判断  氯仿被染成蓝色者为阳性反应，呈现微灰绿色或不染色者为阴性反应。阳性反应时，可根据蓝色的深浅程度，如浅蓝色、深蓝色、黑蓝色分别以＋、＋＋、＋＋＋、＋＋＋＋号表示之。

5.注意事项  尿液加奥氏试剂后，试管加塞颠倒混合，此时应注意用食指压紧橡皮塞，以防管内液体喷出。

（八）尿沉渣的检查

尿沉渣有两类：有机沉渣和无机沉渣。有机沉渣包括各种细胞和各种管型，无机沉渣包括碱性尿中的盐类结晶和酸性尿中的盐类结晶。

1.尿沉渣标本的制备与检查方法

（1）将尿液静置1h或低速（1000r/min）离心5～10min。

（2）取沉淀物1滴，置于载玻片上。用玻棒轻轻涂布使其分散开来。滴加1滴稀碘溶液（不加也可），加盖玻片，低倍镜观察。

（3）镜检时，宜将聚光器降低，缩小光圈，使视野稍暗，用低倍镜观察得到大体印象后转换高倍镜仔细观察。

2.尿中的有机沉渣

（1）上皮细胞

①肾上皮细胞 呈圆形或多角形。细胞核大而明显，核呈圆形或椭圆形，位于细胞中央。细胞浆中有小颗粒。

②肾盂及尿路上皮细胞  比肾上皮细胞大，肾盂上皮呈高脚杯状，细胞核较大，偏心。尿路上皮细胞多呈纺锤形，也有呈多角形及圆形，核大，位于中央或略偏心。

③膀胱上皮细胞  为大而多角的扁平细胞，内有小而圆或椭圆形的核。

尿中上皮细胞（图10-1）。

（2）血细胞、脓细胞及黏液

①红细胞  典型的红细胞形态呈双凹盘形，淡黄色；但在高渗尿中呈皱缩状；在低渗环境中，则呈影红细胞（Shadow cell）。

②白细胞  新鲜尿中，外形与外周血中的白细胞结构一样，只是没有染色的核不清楚，浆内颗粒清晰可见。炎症时，外形多不规则，结构模糊，浆内充满粗大颗粒，核不清楚，细胞常呈团，界线不清（细胞肿胀，形态不规则，结构不清，常成团分布），此种细胞称为脓细胞。

③黏液 为无结构的带状物，被稀碘液染成淡黄色，比透明管型宽，称为假管型。

图10－1  尿中的上皮细胞

                1.肾上皮细胞 2.肾盂及尿路上皮细胞 3.膀胱上皮细胞

 

（3）管型（尿圆柱）

①上皮管型 由脱落的肾上皮细胞与蛋白性物质粘合而成。能看到其中的细胞。

②颗粒管型  为肾上皮细胞变性、崩解所形成的管型。细胞结构不明显，表面散在有大小不等的颗粒。

③透明管型  结构细致、均匀、透明、边缘明显，长短不一，伸直而少弯曲。

④红细胞管型  有红细胞与蛋白性物质粘合而成，或是红细胞聚集在透明管型之中而形成。

⑤脂肪管型  为上皮管型和颗粒管型脂肪变性而形成，是一种较大的管型，表面有脂肪滴和脂肪结晶，有强的屈光性。

⑥蜡样管型  质地均匀，轮廓明显，具有毛玻璃样的闪光，表面似蜡块，长而直，很少有弯曲，较透明管型宽。尿中管型模式（图10-2）。

 

图10－2尿液中沉渣中各种管型            图10－3碱性尿液中无机盐沉渣

3.尿中的无机沉渣

（1）碱性尿中的无机沉渣（图10-3）。

①碳酸钙结晶  圆形，具有放射状线纹。此外有哑铃状、磨刀石状、饼干状等。

②磷酸铵镁结晶  为多角棱柱体及棺盖状结晶，也有雪花片状或羽毛状。

③磷酸钙（镁）结晶  为无定形灰色颗粒。有时呈三棱形、聚集成束。

④尿酸铵结晶 为黄色或褐色，圆形，表面有刺突，类似曼陀罗果穗状。

（2）酸性尿中的无机沉渣（图10-4）。

①草酸钙结晶  为四角八面体 ，如信封状，有十字形折光体。

②硫酸钙结晶 为长棱柱或针状，有时聚集成束状、扇状。

③尿酸结晶   为棕黄色的磨刀石状、叶簇状、菱形片状、十字状或梳状等。

④尿酸盐  呈棕黄色小颗粒状，聚积成堆。

 

图10－4酸性尿中无机盐沉渣

 

（九）尿液其他沉淀物的检查

1.细菌 采尿时如无菌操作仍发现有大量细菌，则表明尿道感染。

2.酵母  通常为酵母污染，诊断意义不大。

3.原虫性尿 多为粪便污染所致，亦可见于生殖道的毛滴虫污染。

4.寄生虫卵 寄生于尿、生殖道内的虫卵。如猪肾虫、狗肾线虫等。

5.精子 主要见于狗。

6.脂肪滴 由于肾上皮细胞、白细胞发生脂肪变性，尿内可出现发亮的大小不等的小滴，呈圆形，是中性脂类，能被苏丹Ⅲ染色。