实验十一  实验室便常规检验

 

目 的 和 要 求

 

了解粪便检验的内容，掌握酸碱度及粪便潜血检验的方法。对粪中寄生虫卵的检查，应有初步的认识。

方 法 和 内 容

 

（一）粪便酸碱度测定

1.器材与试剂  广泛PH试纸、酸度计等。

2.操作方法  常用PH试纸法。取PH试纸1条，用蒸馏水浸湿（若粪便稀软则不必浸湿），贴于粪便表面数秒钟，取下纸条与PH标准色板进行比较，即可测得粪便的PH。也可用“手枪式酸度计”，将电极直接与粪球接触，即可读出PH。

（二）粪便潜血检验

1.原理 与尿液潜血检验同。

2.试剂与器材

（1）联苯胺冰醋酸液  联苯胺约0.1g，加冰醋酸约2ml，振荡，溶解。临用时配制，不能久存。

（2）30％过氧化氢溶液。

（3）载玻片，镊子，酒精灯，小试管等。

3.操作方法

（1）用竹镊子在粪便的不同部分，选取绿豆大小的粪块，置洁净的载玻片上涂成直径约1cm的范围。如粪便干燥，可加少量蒸馏水调和涂布。

（2）将玻片在酒精灯上缓缓通过数次，以破坏粪中的过氧化氢酶。

（3）冷后，滴加联苯胺冰醋酸液10～20滴及新鲜30％过氧化氢溶液10～20滴，用火柴棒搅动混合，将玻片置于白色背景上观察。

4.根据颜色的出现时间，用“±”或1～3个“＋”号表示结果。详见表11－1。

5.注意事项

（1）所用器材应清洁无血迹。

（2）一定要将粪便标本加热处理，否则可呈现假阳性。

（3）肉食动物应禁食3天肉类食物。

 

表11—1 粪便潜血检验结果判定表

符号	蓝色开始出现的时间（s）	符号	蓝色开始出现的时间（s）
±	60	＋＋	15
＋	30	＋＋＋	3

 

（4）联苯胺、过氧化氢液贮存时间过久者，不易发生颜色反应。

（三）粪中病理混杂物的观察

粪中除饲料残渣外，在病理情况下，往往混有血细胞、脓细胞、上皮细胞等物。肉食动物若发生阻塞性黄疸，还可见到大量脂肪酸；胰腺疾病时，因胰液分泌紊乱，出现大量中性脂肪。

1.粪便涂片方法  由粪便不同部分采取少许粪块，置载玻片上，加少量生理盐水，用火柴棒混合并涂成薄片，以能透过书报字迹为宜，加盖玻片，用低倍镜观察整个图片，然后用高倍镜仔细观察。

2.观察

（1）红细胞  为小而圆、无细胞核的发亮物，常散在或与白细胞同时出现。

（2）白细胞  为圆形、有核、结构清晰的细胞，常分散存在。

（3）脓球  结构模糊不清，核隐约可见，常常聚集在一起甚至成堆存在。

（4）上皮细胞  柱状上皮细胞来自肠黏膜，扁平上皮细胞来自肛门附近。

（5）中性脂肪  镜检淡黄色折光性强，呈滴状或无色有折光块状，苏丹Ⅲ染色为红色，在冷乙醇或氢氧化钠中不溶，但加热或用乙醚可溶化。

（6）游离脂肪酸  为无色细长针状结晶或块状，苏丹Ⅲ染色块状呈红色，针状结晶不着色，加热、冷乙醇、氢氧化钠和乙醚均可使其溶化。

（7）结合脂肪酸 为针束状或块状，苏丹Ⅲ染色不着色，除冷乙醇可使其溶化外，加热、氢氧化钠和乙醚都不会使其溶化。

（四）粪中寄生虫卵的观察

1.原理 密度较小的线虫卵、绦虫卵及球虫卵囊等，可悬浮在饱和盐水中；密度较大的吸虫卵，可离心沉淀。用这些方法处理粪便，涂制在载片上观察。

2.器材与试剂

（1）载玻片、盖玻片、小烧杯、60目金属铜筛、显微镜等。

（2）饱和食盐水 蒸馏水100ml与氯化钠30～35g混合，煮沸溶解，冷后除去未溶解的氯化钠，即得饱和盐水。

3.操作方法

（1）直接涂片法 本法是最简便和最常用的虫卵检查法，但检出率很低。检查时在洁净的载片上滴少许50％的甘油水溶液，在其中放少量的被检粪便，然后用火柴杆或牙签等加以搅拌，去掉粪便中硬固的渣子，使载片上有一层均匀的粪液，然后盖上盖玻片镜检。

（2）饱和盐水漂浮法  于容积约为50ml烧杯内，加少量饱和盐水，用竹签挑取不同部位的粪便约5～10g，在饱和盐水中调成糊状，再加饱和盐水，搅成稀水样，挑去大块粪渣，加饱和盐水至满，覆以载玻片。静置30min后，小心翻转载玻片，加盖玻片镜检。

（3）沉淀法  取被检粪便约5g，加50ml水搅拌均匀，用金属筛过滤。滤液静置沉淀20～40min或用离心机离心2～3min后，倾去上清液，保留沉渣，再加水混匀，再沉淀，如此反复操作直到上层液体透明后，弃去上清液，吸取沉渣涂片镜检。

（4）观察 寄生虫虫卵大小极不一致，观察时注意形状、大小、卵壳及卵盖、卵细胞等，按照寄生虫图谱所描绘的各种畜禽寄生虫虫卵进行辨认。

4.注意事项

（1）制备涂片不可太厚，以能透视书报字迹为宜。

（2）先以低倍镜观察，按上下、左右方向逐次移动以检查全片，必要时转换高倍镜观察。