实验三 精液生理特性及品质检查

一、目的要求

掌握家畜精子畸形率的测定方法，熟悉精子的正常形态。

二、实验材料

（一）材料  牛、羊、猪或兔等任何一种家畜的新鲜精液或冷冻精液

（二）器械  高倍显微镜，计数器，载玻片，盖玻片

（三）药品  0.5％龙胆紫酒精溶液

三、内容和步骤

（一）精液性状的肉眼检查

1.射精量  将采得的精液倒入有刻度试管或集精杯中，测其容量。牛正常射精量4-8ml，猪150-500 ml，羊0.5-2 ml。

2.色泽和气味  家畜的精液通常乳白色或灰白色。

马、猪的精液稀薄，呈灰白色；牛、羊的精液浓密，呈乳白色。家畜精液无味或略有腥味。

3.云雾状的观察

取原精液一滴于在载玻片上不加盖玻片，用低倍镜观察精液滴的边缘部分。可见牛羊的精液翻腾滚动的云雾状态；猪马的精液无此现象。

（二）精子活力与密度检查

1、活力检查

将精液轻轻摇动或用洁净的玻璃棒搅动，用微量移液器或玻璃棒取精液10 uL,放于预温后载玻片中央，盖上载玻片，在载物台上预温片刻，用推进器将载玻片推至物镜下，在100和400倍下进行观察。通常采用0～1.0的十级评分法，也就是观察视野范围内直线前行的精子数占整个精子数的百分比，如80%的精子是直线前行的为0.8级，以此类推。公猪的新鲜精液精子活率一般是0.7～0.8级。

2、密度检查

方法为取原精一滴于载玻片上，加上盖玻片，在200-400倍镜下观察。评级标准如下：

稠密：整个视野中难于看出单个精子的情况，密度约为109个/ml以上。

中等：精子之间有明显的空隙，可看出单个精子的活动情况，密度约为2×108个/mL。

稀薄：精子之间空隙很大，稀疏地散布于视野之中，密度在2×108个/mL以下。

 （三）精子畸形率测定

精子畸形率检查，主要是通过精子的形态检查，计算不正常的精子占总精子数的百分率来判断精液的质量。

（1）精液的稀释：

为了方便观察，抹片后，精子在载玻片的分布密度要适当，牛、羊新鲜精液要用生理盐水稀释后再抹片。牛的精液按1:5稀释，羊的精液按1:10稀释，并混合均匀。

（2）抹片与风干

左手食指和拇指向上捏住载玻片两端，使载玻片处于水平状态，取5ul稀释后的精液滴至载玻片右侧。右手拿一块载玻片或盖玻片，放在精液滴的左侧，使其与左手拿的载玻片呈向右的45度角，盖玻片向右拉至精液刚好进入角缝中，然后平稳地向左推至左边（不得再向回拉）。抹片后，使其自然风干。

（3）固定

在抹片上滴95%的酒精约500微升，固定4min后，甩去多余的酒精。

（4）染色

将载玻片放在片架上，滴上0.5%的龙胆紫酒精染色液2-5滴，完全覆盖，5min后，用洗瓶或自来水轻轻冲去染色剂，甩去水分晾干。

（5）观察

载玻片放在400倍的显微镜下进行观察，记录3个视野200个左右的精子。

（6）结果分析

下列精子可被视为畸形精子：

头部膨大、头部小于正常大小、双头、头部不完整、尾部折回、尾部卷曲、尾部套索、双尾、断尾、有近端原生质小滴。

家畜精液畸形精子比例最高不应超过18%。

四、实验报告

（1）写出本小组的畸形率检测实验结果。

（2）绘制出4种以上的常见精子畸形的形态示意图；

（3）简要分析影响家畜精液品质的原因。